ProteanFect™ Max Mouse Immunocyte Transfection Kit/小鼠原代免疫细胞转染试剂盒是一款基于自组装蛋白纳米颗粒的核酸转染试剂，专为小鼠原代免疫细胞设计。作为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂，在延续 ProteanFect™ Max优势的基础上，这款试剂盒可更为高效安全地将基因递送至小鼠原代免疫细胞中。供研究用途。
| 产品货号 | 规格（试剂B） | 价格（CNY） | 库存 |
|---|---|---|---|
| PT03-0010A | 0.1 mL | 3738 | 现货 |
| PT03-0020A | 0.2 mL | 6268 | 现货 |
| PT03-0050A | 0.5 mL | 13718 | 现货 |
| PT03-0100A | 1.0 mL | 22998 | 现货 |
| PT03-0500A | 5.0 mL | 98898 | 现货 |
转染性能
发表
Zhu, P. et al. Efficient Generation of CAR-T By the First Coacervate-Based Gene Delivery System. ASH Annual Meeting & Exposition, (2024).
Gao, X. et al. The First Coacervate-based Delivery System for Advanced Gene Therapy. ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts, (2025).
Gao, X. et al. The First Coacervate-Based Delivery System for CAR-T Cell Engineering and Manufacturing. Presented at ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts.
产品信息
试剂盒成分说明与储存方式
ProteanFect™ Max小鼠原代免疫细胞转染试剂盒在干冰中运输，收到后应存放于 -20℃，直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒也包含阳性对照样品，编码绿色荧光蛋白（EGFP）的mRNA，以验证实验操作及试剂效果。开封后，为确保试剂的最佳性能，需根据表1中的存储条件妥善保管各组分。
| 成分说明 | 存储方式 |
|---|---|
| Reagent A (for Mouse Immunocyte) | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Reagent B (for Mouse Immunocyte) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Reagent C (for Mouse Immunocyte) | 如有析出，65℃水浴完全溶解后使用； 打开使用后，保存于2-8℃ |
| EGFP-mRNA阳性对照 | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
运输方式
干冰低温运输
可转染细胞类型
目前使用ProteanFect™ Max 可成功转染以下所列细胞类型，也适用于其他小鼠原代免疫细胞
| 细胞系 | 用于转染的兼容核酸 |
|---|---|
| 小鼠原代T细胞 | mRNA, siRNA |
| 小鼠原代 NK 细胞 | mRNA, siRNA |
| 小鼠原代γδ T 细胞 | mRNA, siRNA |
| 小鼠原代Treg 细胞 | mRNA, siRNA |
| 小鼠原代 CD4+细胞 | mRNA, siRNA |
| 小鼠原代 CD8+细胞 | mRNA, siRNA |
| 小鼠原代B细胞 | mRNA, siRNA |
实验操作
实验操作步骤表（以96孔板转染mRNA为例）
| 步骤图 | 步骤 | ProteanFect™ Max小鼠原代免疫细胞转染试剂转染不同类型核酸的实验操作步骤说明（以96孔板转染为例） |
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1 配置ProteanFect™转染体系 |
1.1 将Reagent A (for Mouse Immunocyte)与mRNA混合：在40 µL Reagent A (for Mouse Immunocyte)中加入0.5 µg mRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀）。 1.2 加入Reagent B (for Mouse Immunocyte)轻柔充分混匀：往上述混合物中加入0.7 μL Reagent B (for Mouse Immunocyte)混匀。 1.3 加入Reagent C (for Mouse Immunocyte) 混匀：往上述混合物中加入10 μL Reagent C (for Mouse Immunocyte) 混匀。 |
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2 细胞处理 | 2.1 小鼠原代免疫细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：取待转染小鼠原代免疫细胞，300 g离心5分钟，收集细胞沉淀，去上清，加入Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）重悬并洗涤，调至1×10⁷ - 1.5×10⁷ cells/mL 备用。 |
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3 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞：将上述配置好的 ProteanFect™转染体系与20 µL细胞悬液混合均匀（可直接在离心管中孵育）。 3.2 孵育：37℃孵育15-30分钟。 3.3 终止反应与洗涤：加入至少200 µL完全培养基，300 g离心5分钟，弃上清（为避免细胞损失，无需完全弃尽）。 3.4 细胞培养与观察：加入适量完全培养基，进行细胞培养，后续可根据实验目的进行基因表达检测。 |
| 步骤图 | 步骤 |
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常见问题解答
延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间，通常不超过45分钟。
双链 DNA 在原代细胞中的转染可能引发一定程度的毒性反应，如炎症应激等。以小鼠原代 T 细胞为例，使用质粒 DNA 转染可能导致显著的细胞毒性，因此不建议在此类细胞中进行质粒 DNA 的转染操作。
小鼠原代T细胞可使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-4天内均可转染。可根据实验结果选择最佳转染时间。未激活的小鼠原代T细胞转染效率较低。（详细操作和技巧可参考微信公众号“西湖凝聚体”中的转染攻略→鼠原代T）。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect™试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，推荐使用离心管进行孵育，转染体系参照表3，不会影响转染效率。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。
