ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠原代免疫细胞转染试剂盒是ProteanFect Max系列中的一款专为小鼠原代免疫细胞基因编辑而设计的产品。该试剂盒基于自组装蛋白纳米颗粒，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂，能够更高效且安全地将基因编辑工具RNP（Cas9 protein和guide RNA）递送至小鼠原代免疫细胞内，进而实现高效的基因编辑。
| Number | Standard | Price(USD) | Stock |
|---|---|---|---|
| PT09-0010A | 0.1 mL | 5998 | 现货 |
| PT09-0020A | 0.2 mL | 11598 | 现货 |
| PT09-0050A | 0.5 mL | 22248 | 现货 |
| PT09-0100A | 1.0 mL | 35418 | 现货 |
| PT09-0500A | 5.0 mL | 154878 | 现货 |
Transfection Performance
Publication
Zhu, P. et al. Efficient Generation of CAR-T By the First Coacervate-Based Gene Delivery System. ASH Annual Meeting & Exposition, (2024).
Gao, X. et al. The First Coacervate-based Delivery System for Advanced Gene Therapy. ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts, (2025).
Gao, X. et al. The First Coacervate-Based Delivery System for CAR-T Cell Engineering and Manufacturing. Presented at ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts.
Documents
Product Information
Components & Storage
ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠原代免疫细胞转染试剂盒采用干冰运输，收货后需存放于-80℃，直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向小鼠Trac 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据下表所列存储条件妥善存放。(Mouse Trac-sgRNA的靶向序列为TATGGATTCCAAGAGCAATG)
| Components | Storage |
|---|---|
| Reagent A (PT09) | 打开使用后，保存于2-8 °C |
| Reagent B (PT09) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Reagent C (PT09) | 如有析出，65℃水浴完全溶解后使用； 打开使用后，保存于2-8 °C |
| Cas9 protein (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Mouse Trac-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
Shipping Information
干冰低温运输
Compatible Cell Lines
ProteanFect™ CRISPRMax Ultra 小鼠原代免疫细胞基因编辑转染试剂盒可实现编辑的小鼠原代免疫细胞包括：
| Cell lines | Tested Nucleic Acid Types for Transfection |
|---|---|
| 小鼠原代T细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 NK 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代γδ T 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代Treg 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 CD4+细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 CD8+细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代B细胞 | sgRNA |
Product Data
Transfection Protocol for mRNA per Well of a 96-Well Plate
| Scheme | Step | ProteanFect CRISPRMaxUltra（PT09）小鼠原代免疫细胞转染试剂盒的实验操作步骤说明（以96孔板体系为例） |
|---|---|---|
 |
1 配置ProteanFect转染体系（配置完置于冰上） |
1.1混合Reagent A（PT09）与Cas9 protein和sgRNA 在40 µL Reagent A（PT09）中加入5 pmol （约0.8 µg） Cas9 protein和10 pmol （约0.3 µg） sgRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀） 1.2 加入Reagent B（PT09）并混匀： 往上述混合物中加入0.7 μL Reagent B（PT09），移液枪上下吹打20-30次或涡旋10秒，使其充分混匀 1.3 加入Reagent C（PT09）混匀 往上述混合物中加入10 μL Reagent C（PT09）并混匀 |
 |
2 细胞处理（尽量去除FBS，以免影响转染效果） |
2.1 小鼠原代免疫细胞准备 取待转染细胞，300 g 离心 5 分钟，弃去上清后以 Opti-MEM 重悬细胞沉淀，再次离心。最终用 Opti-MEM 重悬并调整细胞浓度至5×106 - 1.5×10⁷ cells/mL 备用 |
 |
3 细胞转染 |
3.1混合转染体系与细胞 将配置好的 ProteanFect 转染体系与 20 µL 细胞悬液混合后，在离心管中孵育 3.2 孵育 37℃培养箱孵育15-30分钟 3.3 终止反应与洗涤 加入约 5 倍转染体系体积（250 µL）的完全培养基，300 g 离心 5 分钟，弃去上清（可保留少量液体以减少细胞损失） 3.4 细胞培养与观察 加入适量完全培养基，进行细胞培养，72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |
| Scheme | Step |
|---|
Technical FAQ
ProteanFect 系列在原代细胞中的递送过程快速，通常 15–30 分钟内即可完成转染。建议首次使用时分别设置 15 分钟和 30 分钟两个时间点，通过对比细胞活率与转染效率，选择最适合的孵育时间。
小鼠原代T细胞可使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-4天内均可转染，可根据实验结果选择最佳转染时间。未激活的小鼠原代T细胞转染效率较低（详细操作和技巧可参考微信公众号“西湖凝聚体”中的转染攻略→CRISPR）。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。具体操作见表2图注。
RNP中Cas9蛋白和sgRNA的摩尔比推荐在1:1-1:2.5之间。以96孔细胞量的转染体系为例，Cas9蛋白的投入量在0.8 μg-1.6 μg，已能够达到单基因编辑的理想效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测结果的可靠性。
转染后细胞状态可能略有变化，但ProteanFect对细胞活力影响较小。通常在转染后第二天，细胞状态可基本恢复正常。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，12孔板体系及以上推荐在凝聚体配置步骤中采用涡旋方式混匀，在离心管进行孵育，转染体系参照表3，不会影响转染效率。
对于贴壁细胞，可提前一天种板后进行转染，也可消化成细胞悬液进行悬浮转染。具体操作参照表2。
建议sgRNA浓度≥1 μg/μL。如在96孔板体系同时转染多个sgRNA，为确保高效的转染效果，加入的sgRNA总量为10 pmol。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。
