ProteanFect® CRISPRMax Ultra 转染试剂盒是 ProteanFect® 系列产品中专为原代细胞基因编辑而设计的产品。该试剂盒基于自组装蛋白凝聚体，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂，能够更高效且安全地将基因编辑工具 RNP（Cas9 protein 和 guide RNA）递送至细胞内，进而实现高效的基因编辑。
| 产品货号 | 规格（试剂B） | 价格（CNY） | 库存 |
|---|---|---|---|
| PT08-0010A | 0.1 mL | 5878 | 现货 |
| PT08-0020A | 0.2 mL | 10468 | 现货 |
| PT08-0050A | 0.5 mL | 19778 | 现货 |
| PT08-0100A | 1 mL | 31278 | 现货 |
| PT08-0500A | 5.0 mL | 137078 | 现货 |
转染性能
文献引用
| No. | Journal | Cell Type | Cargo type | Product SKU | Citation PDF |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Theranostics | Primary human Treg cells | Cas9 protein and sgRNA | PT08 | PubMed ID: 42707988 |
产品信息
试剂盒成分说明与储存方式
ProteanFect® CRISPRMax Ultra转染试剂盒采用干冰运输，收货后需存放于-80℃，直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向人TRAC 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据表 1 所列存储条件妥善存放。
| 成分说明 | 存储方式 |
|---|---|
| Reagent A（PT08） | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Reagent B（PT08） | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Reagent C（PT08） | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Cas9 protein (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Human TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
运输方式
干冰低温运输
可转染细胞类型
ProteanFect® CRISPRMax Ultra转染试剂盒可成功转染以下所列细胞类型，也广泛适用于其他多种细胞
| 细胞类型 | 用于转染的兼容核酸 |
|---|---|
| 人原代T细胞（CD3/CD4/CD8） | sgRNA |
| 人原代B细胞 | sgRNA |
| 人原代NK细胞 | sgRNA |
| 人外周血单核细胞（PBMC） | sgRNA |
| 诱导多能干细胞（iPSCs） | sgRNA |
| 人 CD34+ 造血干细胞（HSCs） | sgRNA |
| 脐带间充质干细胞（UC-MSCs） | sgRNA |
| 人皮肤成纤维细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代骨髓来源巨噬细胞（BMDM） | sgRNA |
| 小鼠原代骨髓来源树突状细胞（BMDC） | sgRNA |
| 小鼠原代B细胞 | sgRNA |
| 小鼠造血干细胞（KSL） | sgRNA |
| 小鼠原代神经元细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代少突胶质细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代星形胶质细胞 | sgRNA |
| 大鼠原代星形胶质细胞 | sgRNA |
| 胰岛干细胞类器官 | sgRNA |
| 猪原代巨噬细胞 | sgRNA |
| 牛原代成纤维细胞 | sgRNA |
| 罗氏沼虾血细胞 | sgRNA |
| 鸡原始生殖细胞 | sgRNA |
| 大黄鱼原代间充质干细胞 | sgRNA |
实验操作
常见问题解答
转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。建议：1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间。通常原代细胞不超过30分钟，细胞系不超过2小时。2）提升ProteanFect转染量：适当增加转染体系至初始的1.5-2.5倍。
1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后使用。
对于原代细胞，充分活化有助于提高转染效率，因此建议在适当活化后进行转染。例如，人原代T细胞可使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-10天内均可转染。（详细操作和技巧可参考微信公众号“西湖凝聚体”中的转染攻略→人原代T）。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。具体操作见说明书表2。
RNP中Cas9蛋白和sgRNA的摩尔比推荐在1：1-1：2.5之间。以96孔细胞量的转染体系为例，Cas9蛋白的投入量在0.8 μg-1.6 μg ，已能够达到单基因编辑的理想效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后细胞状态可能略有变化，但ProteanFect对细胞活力影响较小。通常在转染后第二天，细胞状态可基本恢复正常。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，12 孔板体系及以上推荐在凝聚体配置步骤中采用涡旋方式混匀，在离心管进行孵育，转染体系参照表3，不会影响转染效率。
对于贴壁细胞，可提前一天种板后进行转染，也可消化成细胞悬液进行悬浮转染。具体操作参照表2。
建议sgRNA浓度≥1 μg/μL。如在96孔板体系同时转染多个sgRNA，为确保高效的转染效果，加入的sgRNA总量为10 pmol。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。
