产品货号 PT06
ProteanFect® CRISPRMax小鼠原代免疫细胞转染试剂盒，在ProteanFect® Max系列产品中专门用于小鼠原代免疫细胞基因编辑。ProteanFect® 基于自组装蛋白凝聚体，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂。ProteanFect® CRISPRMax小鼠原代免疫细胞转染试剂盒能够更高效且安全地将基因编辑工具递送至小鼠原代免疫细胞内，进而实现高效的基因编辑。
| 产品货号 | 规格（试剂B） | 价格（CNY） | 库存 |
|---|---|---|---|
| PT06-0010A | 0.1 mL | 5208 | 现货 |
| PT06-0020A | 0.2 mL | 10088 | 现货 |
| PT06-0050A | 0.5 mL | 19348 | 现货 |
| PT06-0100A | 1.0 mL | 30798 | 现货 |
| PT06-0500A | 5.0 mL | 134678 | 现货 |
转染性能
PT06文献引用
| No. | Journal | Cell Type | Cargo type | Citation PDF |
|---|---|---|---|---|
| 1 | Signal Transduction and Targeted Therapy | Primary mouse CD4+ T cells | Cas9 mRNA and sgRNA | PubMed ID: 40854873 |
| 2 | European Journal of Immunology | Primary mouse CD4+ T cells | Cas9 mRNA and sgRNA | PubMed ID: 41830088 |
产品信息
试剂盒成分说明与储存方式
ProteanFect® CRISPRMax 小鼠原代免疫细胞转染试剂盒采用干冰运输，收货后需存放于推荐存储温度下直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向小鼠Trac 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据表 1 所列存储条件妥善存放。（mouse Trac-sgRNA的靶向序列为TATGGATTCCAAGAGCAATG）
| 成分说明 | 存储方式 |
|---|---|
| Reagent A (for Mouse Immunocytes) | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Reagent B (for Mouse Immunocytes) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Reagent C (for Mouse Immunocytes) | 如有析出，65℃水浴完全溶解后使用； 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Cas9 mRNA (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Mouse TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
运输方式
干冰低温运输
可转染细胞类型
ProteanFect® CRISPRMax 小鼠原代免疫细胞转染试剂盒可实现编辑的小鼠原代免疫细胞包括：
| 细胞系 | 用于转染的兼容核酸 |
|---|---|
| 小鼠原代T细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 NK 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代γδ T 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代Treg 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 CD4+细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 CD8+细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代B细胞 | sgRNA |
实验操作
| 步骤图 | 步骤 |
|---|
常见问题解答
ProteanFect® Max系列转染原代细胞的摄入过程迅速，一般在15-30分钟即可完成。可以分别转染15分钟和30分钟，综合考虑细胞活率和转染效率，选择合适的转染时间。
小鼠原代T细胞可使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-4天内均可转染。可根据实验结果选择最佳转染时间。未激活的小鼠原代T细胞转染效率较低。（详细操作和技巧可参考微信公众号“西湖凝聚体”中的染攻略→CRISPR）。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。具体操作见表2图注。
ProteanFect™具有较高的核酸加载量，可同时转染多个核酸，不会影响转染效率，且共表达率为90%以上。因此我们推荐将EGFP mRNA和Cas9 mRNA／sgRNA共转。推荐使用量，以96孔细胞数为例，0.2μg Cas9 mRNA、0.2μg sgRNA、0.1μg EGFP mRNA，EGFP的阳性率可以指示转染效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect® 试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，推荐使用离心管进行孵育，转染体系参照表3，不会影响转染效率。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。
