ProteanFect CRISPR Ultra 转染试剂盒是 ProteanFect 系列产品中专为难转细胞系基因编辑而设计的产品。该试剂盒基于自组装蛋白纳米颗粒，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂，能够更高效且安全地将基因编辑工具 RNP（Cas9 protein 和 guide RNA）递送至细胞内，进而实现高效的基因编辑。
| Number | Standard | Price(USD) | Stock |
|---|---|---|---|
| PT07-0010A | 0.1 mL | 5758 | 现货 |
| PT07-0030A | 0.3 mL | 12408 | 现货 |
| PT07-0050A | 0.5 mL | 16838 | 现货 |
| PT07-0100A | 1 mL | 26358 | 现货 |
| PT07-0500A | 5.0 mL | 115888 | 现货 |
Transfection Performance
Publication
Zhu, P. et al. Efficient Generation of CAR-T By the First Coacervate-Based Gene Delivery System. ASH Annual Meeting & Exposition, (2024).
Gao, X. et al. The First Coacervate-based Delivery System for Advanced Gene Therapy. ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts, (2025).
Gao, X. et al. The First Coacervate-Based Delivery System for CAR-T Cell Engineering and Manufacturing. Presented at ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts.
Documents
Product Information
Components & Storage
ProteanFect CRISPR Ultra 转染试剂盒采用干冰运输，收到后应存放于 -80℃，直至使用。试剂盒规格依据 Reagent B 的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向人TRAC 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据表 1 所列存储条件妥善存放。
| Components | Storage |
|---|---|
| Reagent A（PT07) | 打开使用后，保存于 2-8℃ |
| Reagent B（PT07) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Cas9 protein (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP-mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Human TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
Shipping Information
干冰低温运输
Compatible Cell Lines
目前使用ProteanFect CRISPR Ultra 转染试剂盒可成功转染以下所列细胞系类型，也广泛适用于其他多种细胞
| Cell lines | Tested Nucleic Acid Types for Transfection |
|---|---|
| Jurkat T（人T淋巴细胞白血病细胞） | sgRNA |
| LX-2（人肝星状细胞） | sgRNA |
| HepG2（人肝肿瘤细胞） | sgRNA |
| THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系） | sgRNA |
| Raji（人Burkitt淋巴瘤细胞） | sgRNA |
| K562（人慢性粒细胞白血病细胞） | sgRNA |
| SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞系） | sgRNA |
| U2OS（人骨肉瘤细胞） | sgRNA |
| U937（人类淋巴瘤细胞） | sgRNA |
| HFF（人皮肤成纤维细胞） | sgRNA |
| HEK-293（人胚胎肾细胞系） | sgRNA |
| MC38（小鼠结肠癌细胞） | sgRNA |
| RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细）胞） | sgRNA |
| LLC（小鼠Lewis肺癌细胞） | sgRNA |
| C2C12（小鼠成肌细胞） | sgRNA |
| COS7（猴肾细胞系） | sgRNA |
Product Data
Transfection Protocol for mRNA per Well of a 96-Well Plate
| Scheme | Step | ProteanFect CRISPR Ultra（PT07）转染试剂盒操作步骤说明（以96孔板体系为例） |
|---|---|---|
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1 配置ProteanFect转染体系（配置完置于冰上） |
1.1混合Reagent A（PT07）与Cas9 protein和sgRNA 在40 µL Reagent A（PT07）中加入0.8 µg（约5 pmol）Cas9 protein和0.3 µg（约10 pmol）sgRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀） 1.2 加入Reagent B（PT07）并混匀 往上述混合物中加入1.4 µL Reagent B（PT07），移液枪上下吹打20-30次或涡旋10秒，使其充分混匀 |
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2 细胞处理（尽量去除FBS，以免影响转染效果） |
2.1 悬浮细胞准备 取待转染细胞，300 g 离心 5 分钟，弃去上清后以 Opti-MEM 重悬细胞沉淀，再次离心。最终用 Opti-MEM 重悬并调整细胞浓度至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用 2.2 贴壁细胞准备 转染前汇合率应保持在50%-80%；弃去培养基后，用Opti-MEM轻柔清洗细胞两次，并加入20 µL Opti-MEM备用 |
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3 细胞转染 |
3.1混合转染体系与细胞 将配置好的 ProteanFect 转染体系与 20 µL 细胞悬液混合后，在离心管中孵育；或直接将转染体系加入贴壁细胞中 3.2 孵育 37℃培养箱孵育45-60分钟 3.3 终止反应与洗涤 加入约 5 倍转染体系体积（200 µL）的完全培养基，300 g 离心 5 分钟，弃去上清（可保留少量液体以减少细胞损失）；贴壁细胞可直接弃去混合液并补加培养基 3.4 细胞培养与观察 加入适量完全培养基，进行细胞培养，72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |
| Scheme | Step |
|---|
Technical FAQ
转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。建议：1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间。通常细胞系不超过2小时。2）提升ProteanFect转染量：适当增加转染体系至初始的1.5-2.5倍。
1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后使用。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。具体操作见说明书表2。
RNP中Cas9蛋白和sgRNA的摩尔比推荐在1：1-1：2.5之间。以96孔细胞量的转染体系为例，Cas9蛋白的投入量在0.8 μg-1.6 μg ，已能够达到单基因编辑的理想效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，12 孔板体系及以上推荐在凝聚体配置步骤中采用涡旋方式混匀，在离心管进行孵育，转染体系参照表3，不会影响转染效率。
对于贴壁细胞，可提前一天种板后进行转染，也可消化成细胞悬液进行悬浮转染。具体操作参照说明书表2。
建议sgRNA浓度≥1 μg/μL。如在96孔板体系同时转染多个sgRNA，为确保高效的转染效果，加入的sgRNA总量为10 pmol。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。
