ProteanFect™ CRISPR 转染试剂盒在ProteanFect™系列产品中专门用于难转细胞系基因编辑。ProteanFect™基于自组装蛋白纳米颗粒，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂。ProteanFect™ CRISPR 转染试剂盒能够更高效且安全地将基因编辑工具递送至细胞内，进而实现高效的基因编辑。仅供研究使用。
| 产品货号 | 规格（试剂B） | 价格（CNY） | 库存 |
|---|---|---|---|
| PT04-0010A | 0.1 mL | 5008 | 现货 |
| PT04-0030A | 0.3 mL | 10788 | 现货 |
| PT04-0050A | 0.5 mL | 14638 | 现货 |
| PT04-0100A | 1.0 mL | 22918 | 现货 |
| PT04-0500A | 5.0 mL | 100768 | 现货 |
转染性能
发表
Zhu, P. et al. Efficient Generation of CAR-T By the First Coacervate-Based Gene Delivery System. ASH Annual Meeting & Exposition, (2024).
Gao, X. et al. The First Coacervate-based Delivery System for Advanced Gene Therapy. ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts, (2025).
Gao, X. et al. The First Coacervate-Based Delivery System for CAR-T Cell Engineering and Manufacturing. Presented at ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts.
产品信息
试剂盒成分说明与储存方式
ProteanFect™ CRISPR 转染试剂盒采用干冰运输，收货后需存放于推荐储存温度下直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向人TRAC 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据下表 所列存储条件妥善存放。
| 成分说明 | 存储方式 |
|---|---|
| Reagent A (for CRISPR/Cas9) | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Reagent B (for CRISPR/Cas9) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Cas9 mRNA (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Human TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
运输方式
干冰低温运输
可转染细胞类型
使用ProteanFect™ CRISPR 转染试剂盒可成功编辑的细胞类型包括：
| 细胞系 | 用于转染的兼容核酸 |
|---|---|
| Jurkat T（人类T淋巴细胞白血病细胞） | sgRNA |
| LX-2（人类肝星状细胞) | sgRNA |
| HepG2（人肝肿瘤细胞） | sgRNA |
| THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系） | sgRNA |
| Raji（人Burkitt淋巴瘤细胞） | sgRNA |
| K562（人慢性粒细胞白血病细胞） | sgRNA |
| MOLT-16 （人T淋巴细胞白血病细胞） | sgRNA |
| SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞系） | sgRNA |
| U2OS（人骨肉瘤细胞） | sgRNA |
| U937（人类淋巴瘤细胞） | sgRNA |
| HFF（人皮肤成纤维细胞） | sgRNA |
| HEK-293（人胚胎肾细胞系） | sgRNA |
| MC38（小鼠结肠癌细胞） | sgRNA |
| RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) | sgRNA |
| LLC（小鼠Lewis肺癌细胞） | sgRNA |
| C2C12（小鼠成肌细胞） | sgRNA |
| COS7（猴肾细胞系） | sgRNA |
| H1（人胚胎干细胞系） | sgRNA |
实验操作
实验操作步骤表（以96孔板转染mRNA为例）
| 步骤图 | 步骤 | ProteanFect™ CRISPR 转染不同类型细胞的实验操作步骤说明（以96孔板体系为例） |
|---|---|---|
 |
1 配置ProteanFect™转染体系 |
1.1 将Reagent A (for CRISPR/Cas9) 与mRNA混合：在40 µL Reagent A (for CRISPR/Cas9)中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀） 1.2 加入Reagent B (for CRISPR/Cas9)轻柔充分混匀：往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B (for CRISPR/Cas9)混匀 |
 |
2. 细胞处理 |
2.1 悬浮细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：取待转染细胞，300 g离心5分钟，收集细胞沉淀，去上清，加入Opti-MEM重悬并洗涤，调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用 2.2 贴壁细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：转染前汇合率应保持在50%-80%；弃去培养基后，用Opti-MEM轻柔清洗细胞两次，并加入20 µL Opti-MEM备用 |
 |
3. 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞：将上述配置好的 ProteanFect™转染体系与20 µL细胞悬液（可直接在离心管中孵育）或直接加入贴壁细胞，混合均匀 3.2 孵育：37℃培养箱孵育45-60分钟 3.3 终止反应与洗涤：对于悬浮细胞加入至少200 µL完全培养基，300 g离心5分钟，弃上清；对于贴壁细胞，直接弃去混合液，补加培养基 3.4 细胞培养与观察：加入适量完全培养基，进行细胞培养，后续可根据实验目的进行基因表达检测 |
| 步骤图 | 步骤 |
|---|
常见问题解答
转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。建议：1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间。通常原代细胞不超过1小时，细胞系不超过2小时。2）提升Reagent B用量：适当增加Reagent B的用量，以96孔板为例，细胞系推荐为1-3 μL，根据具体情况进行调整。3）提升ProteanFect转染量：适当增加转染体系至初始的1.5-2.5倍。
1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后使用。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。为节省细胞和试剂，使用96孔板的细胞量即可，转染体系中EGFP mRNA的用量为0.5 μg。
ProteanFect™具有较高的核酸加载量，可同时转染多个核酸，不会影响转染效率，且共表达率为90%以上。因此我们推荐将EGFP mRNA和Cas9 mRNA／sgRNA共转。推荐使用量，以96孔细胞数为例，0.2 μg Cas9 mRNA、0.2 μg sgRNA、0.1 μg EGFP mRNA，EGFP的阳性率可以指示转染效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect™试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，推荐使用离心管进行孵育，转染体系参照说明书表3，不会影响转染效率。
对于贴壁细胞，可提前一天种板后进行转染，也可消化成细胞悬液进行悬浮转染。具体操作参照说明书表2。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。
