ProteanFect™ 转染试剂盒是全球首款自组装蛋白纳米颗粒核酸转染试剂，专为难转细胞系设计，能够实现卓越的外源基因递送与表达。作为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂，ProteanFect™可高效、低毒、简便地将基因递送至细胞中，尤其适用于大片段和多片段基因递送。仅供研究用途。
| 产品货号 | 规格（试剂B） | 价格（CNY） | 库存 |
|---|---|---|---|
| PT01-0010A | 0.1 mL | 2538 | 现货 |
| PT01-0030A | 0.3 mL | 6858 | 现货 |
| PT01-0050A | 0.5 mL | 9798 | 现货 |
| PT01-0100A | 1 mL | 16428 | 现货 |
| PT01-0500A | 5 mL | 70638 | 现货 |
转染性能
发表
Zhu, P. et al. Efficient Generation of CAR-T By the First Coacervate-Based Gene Delivery System. ASH Annual Meeting & Exposition, (2024).
Gao, X. et al. The First Coacervate-based Delivery System for Advanced Gene Therapy. ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts, (2025).
Gao, X. et al. The First Coacervate-Based Delivery System for CAR-T Cell Engineering and Manufacturing. Presented at ASGCT 28th Annual Meeting Abstracts.
产品信息
试剂盒成分说明与储存方式
ProteanFect™ 转染试剂盒在干冰中运输，收到后应存放于 -20℃，直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒包含阳性对照样品，编码绿色荧光蛋白（EGFP）的mRNA和质粒DNA（pDNA），以验证实验操作及试剂效果。开封后，为确保试剂的最佳性能，需根据表1中的存储条件妥善保管各组分。
| 成分说明 | 存储方式 |
|---|---|
| Reagent A | 开封后在2-8°C下储存 |
| Reagent B | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| EGFP pDNA 阳性对照 | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA 阳性对照 | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
运输方式
干冰低温运输
可转染细胞类型
使用ProteanFect™转染试剂盒成功转染的细胞类型包括：
| 细胞系 | 用于转染的兼容核酸 |
|---|---|
| Jurkat T（人类T淋巴细胞白血病细胞） | pDNA、mRNA、siRNA |
| LX-2（人类肝星状细胞) | pDNA、mRNA、siRNA |
| HepG2（人肝肿瘤细胞） | pDNA , mRNA, siRNA |
| THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系） | mRNA, siRNA |
| Raji（人Burkitt淋巴瘤细胞） | mRNA, siRNA |
| K562（人慢性粒细胞白血病细胞） | pDNA , mRNA, siRNA |
| MOLT-16 （人T淋巴细胞白血病细胞） | mRNA, siRNA |
| SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞系） | pDNA , mRNA, siRNA |
| U2OS（人骨肉瘤细胞） | pDNA , mRNA, siRNA |
| U937（人类淋巴瘤细胞） | mRNA, siRNA |
| HFF（人皮肤成纤维细胞） | pDNA , mRNA, siRNA |
| HEK-293（人胚胎肾细胞系） | pDNA , mRNA, siRNA |
| MC38（小鼠结肠癌细胞） | mRNA, siRNA |
| RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) | mRNA, siRNA |
| LLC（小鼠Lewis肺癌细胞） | pDNA , mRNA, siRNA |
| C2C12（小鼠成肌细胞） | pDNA , mRNA, siRNA |
| COS7（猴肾细胞系） | pDNA , mRNA, siRNA |
| H1（人胚胎干细胞系） | pDNA, mRNA, siRNA |
实验操作
实验操作步骤表（以96孔板转染mRNA为例）
| 步骤图 | 步骤 | Instructions for Cell Lines |
|---|---|---|
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1 配置ProteanFect™转染体系 |
1.1 将Reagent A与mRNA混合在40 µL Reagent A中加入0.5 µg mRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀）。 1.2 加入Reagent B轻柔充分混匀往上述混合物中加入1.4 μL Reagent B混匀。 |
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2 转染前细胞处理 |
2.1 悬浮细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）取待转染细胞，300 g离心5分钟，收集细胞沉淀，去上清，加入Opti-MEM重悬并洗涤，调至5×10⁶ - 1×10⁷ cells/mL备用。 2.2 贴壁细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）转染前汇合率应保持在50%-80%；弃去培养基后，用Opti-MEM轻柔清洗细胞两次，并加入20 µL Opti-MEM备用。 |
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3 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞将上述配置好的 ProteanFect™转染体系与20 µL细胞悬液或贴壁细胞混合均匀。 3.2 孵育37℃孵育45-60分钟。 3.3 终止反应与洗涤加入至少200 µL完全培养基，300 g离心5分钟，弃上清；对于贴壁细胞，直接弃去混合液，补加培养基。 3.4 细胞培养与观察加入适量完全培养基，进行细胞培养，后续可根据实验目的进行基因表达检测。 |
| 步骤图 | 步骤 |
|---|
常见问题解答
转染条件需根据细胞类型和培养条件进行优化。建议：1）延长转染时间：根据细胞状态适当延长转染时间。通常原代细胞不超过1小时，细胞系不超过2小时。2）提升Reagent B用量：适当增加Reagent B的用量，以96孔板为例，细胞系推荐为1-3 μL，根据具体情况进行调整。3）提升ProteanFect™转染量：适当增加转染体系至初始的1.5-2.5倍。
多数细胞系经过多代培养后，能够更有效地应对外源DNA的压力，对双链DNA的转染耐受性较高，因此通常可使用质粒DNA进行转染。然而，一些细胞系仍可能对双链DNA较为敏感，导致转染过程中产生毒性反应，如炎症应激。因此，实验中应根据具体细胞系的特性及研究目的选择合适的转染策略。以THP-1（人急性单核细胞白血病细胞系）和Raji（人Burkitt淋巴瘤细胞系）为例，它们不适合使用质粒DNA进行转染。
转染效率受DNA质量影响。建议使用无内毒素试剂盒制备DNA，并确保OD值在1.7-1.9之间；使用无核酸酶纯水将DNA稀释至0.5-2 µg/µL的浓度。
1）为获得良好的转染效率，建议使用活性超过90%的细胞，可以通过台盼蓝染色测定细胞活性。2）不建议使用传代次数超过15次的细胞进行实验。3）新复苏的细胞在转染实验前需传代2-3次，待细胞恢复正常生长后使用。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA或EGFP pDNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect™试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
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