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ProteanFect™ CRISPRMax 小鼠原代免疫细胞转染试剂盒
ProteanFect™ CRISPRMax小鼠原代免疫细胞转染试剂盒，在ProteanFect™ Max系列产品中专门用于小鼠原代免疫细胞基因编辑。ProteanFect™基于自组装蛋白纳米颗粒，为一种非病毒、非电转、非脂质体的转染试剂。ProteanFect™ CRISPRMax小鼠原代免疫细胞转染试剂盒能够更高效且安全地将基因编辑工具递送至小鼠原代免疫细胞内，进而实现高效的基因编辑。
| Number | Standard | Price(USD) | Stock |
|---|---|---|---|
| PT06-0010A | 0.1 mL | 5208 | 现货 |
| PT06-0020A | 0.2 mL | 10088 | 现货 |
| PT06-0050A | 0.5 mL | 19348 | 现货 |
| PT06-0100A | 1.0 mL | 30798 | 现货 |
| PT06-0500A | 5.0 mL | 134678 | 现货 |
Transfection Performance
Documents
Product Information
Components & Storage
ProteanFect™ CRISPRMax 小鼠原代免疫细胞转染试剂盒采用干冰运输，收货后需存放于推荐存储温度下直至使用。试剂盒规格依据Reagent B的体积设定。试剂盒内配备阳性对照样品，其中含有编码绿色荧光蛋白（EGFP）的 mRNA，可用于验证实验操作流程和转染效率；同时还有靶向小鼠Trac 基因的 sgRNA，以此来检验实验操作以及试剂质量。开封后，为保障试剂性能处于最佳状态，各组分应依据表 1 所列存储条件妥善存放。（mouse Trac-sgRNA的靶向序列为TATGGATTCCAAGAGCAATG）
| Components | Storage |
|---|---|
| Reagent A (for Mouse Immunocytes) | 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Reagent B (for Mouse Immunocytes) | 保存于-20℃，避免反复冻融 |
| Reagent C (for Mouse Immunocytes) | 如有析出，65℃水浴完全溶解后使用； 打开使用后，保存于2-8℃ |
| Cas9 mRNA (1 µg/µL) | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| EGFP mRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
| Mouse TRAC-sgRNA (1 µg/µL) 阳性对照 | 保存于-80℃，避免反复冻融 |
Shipping Information
干冰低温运输
Compatible Cell Lines
ProteanFect™ CRISPRMax 小鼠原代免疫细胞转染试剂盒可实现编辑的小鼠原代免疫细胞包括：
| Cell lines | Tested Nucleic Acid Types for Transfection |
|---|---|
| 小鼠原代T细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 NK 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代γδ T 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代Treg 细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 CD4+细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代 CD8+细胞 | sgRNA |
| 小鼠原代B细胞 | sgRNA |
Product Data
Transfection Protocol for mRNA per Well of a 96-Well Plate
| Scheme | Step | ProteanFect™ CRISPRMax 编辑小鼠原代免疫细胞的实验操作步骤说明（以96孔板体系为例） |
|---|---|---|
 |
1. 配置ProteanFect™转染体系 |
1.1 将Reagent A (for Mouse Immunocytes )与mRNA混合：在40 µL Reagent A (for Mouse Immunocytes)中加入0.25 µg Cas9 mRNA和0.25 µg sgRNA，充分混匀（Reagent A使用前需颠倒混匀） 1.2 加入Reagent B (for Mouse Immunocytes)轻柔充分混匀：往上述混合物中加入0.7 μL Reagent B (for Mouse Immunocytes)混匀 1.3 加入Reagent C (for Mouse Immunocytes) 混匀：往上述混合物中加入10 μL Reagent C (for Mouse Immunocytes) 混匀 |
 |
2. 细胞处理（转染液制备完成后再准备待转细胞） | 2.1 小鼠原代免疫细胞准备（尽量去除FBS，以免影响转染效果）：取待转染小鼠原代免疫细胞，300 g离心5分钟，收集细胞沉淀，去上清，加入Opti-MEM（提前预热或恢复至室温）重悬并洗涤，调至1×10⁷ - 1.5×10⁷ cells/mL 备用 |
 |
3. 细胞转染 |
3.1 混合转染体系与细胞：将上述配置好的 ProteanFect™转染体系与20 µL细胞悬液混合均匀（可直接在离心管中孵育） 3.2 孵育：37℃培养箱孵育15-30分钟 3.3 终止反应与洗涤：加入至少200 µL完全培养基，300 g离心5分钟，弃上清（为避免细胞损失，无需完全弃尽） 3.4 细胞培养与观察：加入适量完全培养基，进行细胞培养，72小时后可对靶点进行编辑效率分析 |
| Scheme | Step |
|---|
Technical FAQ
ProteanFect™ Max系列转染原代细胞的摄入过程迅速，一般在15-30分钟即可完成。可以分别转染15分钟和30分钟，综合考虑细胞活率和转染效率，选择合适的转染时间。
小鼠原代T细胞可使用CD3/CD28磁珠或抗体进行激活，激活2-4天内均可转染。可根据实验结果选择最佳转染时间。未激活的小鼠原代T细胞转染效率较低。（详细操作和技巧可参考微信公众号“西湖凝聚体”中的染攻略→CRISPR）。
首次尝试时，建议设置阳性对照组（EGFP mRNA），以检测实验操作和试剂的有效性。使用96孔板的细胞量即可，节省细胞和试剂。具体操作见表2图注。
ProteanFect™具有较高的核酸加载量，可同时转染多个核酸，不会影响转染效率，且共表达率为90%以上。因此我们推荐将EGFP mRNA和Cas9 mRNA／sgRNA共转。推荐使用量，以96孔细胞数为例，0.2μg Cas9 mRNA、0.2μg sgRNA、0.1μg EGFP mRNA，EGFP的阳性率可以指示转染效率。
说明书中提供了最佳转染条件下的细胞数量范围，但在特殊情况下，即使细胞数量较少，也可以进行转染。以96孔板为例，建议细胞数量不低于4×10³/孔，以确保后续检测的可靠性。
转染后，细胞状态可能与未处理组略有差异。但使用ProteanFect™试剂进行转染时，对细胞活力的损伤较小。通常在转染后第二天，细胞状态会基本恢复。
对于小体积转染体系（如96孔板），离心后细胞沉淀不明显是正常现象。细胞沉淀可能散落在离心管侧壁，不影响后续结果。为减少细胞损失，离心后移液时应避免枪头紧贴底部。
如转染细胞量较大，推荐使用离心管进行孵育，转染体系参照表3，不会影响转染效率。
如果您在实验过程中遇到任何问题，欢迎通过扫描下方二维码联系我们的技术微信，或将您的问题发送至我们的电子邮件：tech@nanoportalbio.com。我们的专业团队将竭诚为您解答疑问，提供技术支持。